BLOQUE DE
HEMOSTASIA
TOMA,CONSERVACIÓN Y TIPO DE MUESTRAS;
REACTIVOS
OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
--> Estar en
ayunas la mañana que se realicen las pruebas.
--> Evitar tomar
medicación las
dos semanas previas a las pruebas, sobre todo la que
puedan interferir directamente en las mismas; y si se tiene que tomar obligatoriamente,
se ha de informarlo previamente.
- Algunos medicamentos que pueden interferir son:
ácido acetil salicílico,
heparina,
anticoagulantes orales...
NOTA: tener en cuenta que una muestra se puede
contaminar con
heparina
cuando se obtiene a través de un
catéter de permanencia, por lo cual
se tendrá que
lavar previamente con
suero fisiológico a presión, y
descartar los
5 ml de
sangre.
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| CATÉTER |
--> Las muestras deben ser de
sangre entera, recogidas de manera antiséptica por medio
de
punción venosa, mediante un
sistema de tubo al vacío con
citrato trisódico
en una proporción de
1:9.
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Sistema de extracción de sangre al vacío mediante el
uso de un tubo con citrato( azul), normalmente utilizado
para pruebas de coagulación |
NOTA: si un paciente posee un
hematocrito con un
valor más bajo o más alto
de lo normal, se debería hacer un
reajuste de la concentración de anticoagulante.
PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
En
HEMOSTASIA se trabajan con cuatro tipo de muestras:
--> PLASMA POBRE EN PLAQUETAS
--> PLASMA RICO EN PLAQUETAS
--> PLASMA ABSORBIDO ( AUSENTE DE FACTOR IX)
--> SUERO
¿Qué es el PLASMA?
Líquido en el cual se encuentran inmersos las
células sanguíneas, formado por
múltiples sustancias, entre ellas, todos los
factores plasmáticos que intervienen en la
coagulación. Ejemplos de ellos son:
fibrinógeno,
Factor XII o de contacto,
precalicreína,
etc.
PLASMA POBRE EN PLAQUETAS
Se obtiene mediante
centrifugación de la muestra con citrato durante
10 minutos
a
3000 rpm tan pronto como sea posible después de la extracción de la
misma.
Separar el
sobrenadante formado, colocándolo en un
tubo anticoagulado.
USO: utilizado en la mayoría de las
pruebas de coagulación, ya que , nos
interesa más conocer la
actividad y
presencia de los
factores que intervienen en coagulación, y como se forma el
coagulo de fibrina,
que los factores y estado de las
plaquetas. Por eso mismo las
eliminamos, pero dejando una cierta cantidad, porque también son
necesarias para que este proceso se lleve a cabo.
PLASMA RICO EN PLAQUETAS
Se obtiene
centrifugando la muestra de sangre entera anticoagulada con
citrato durante
10 minutos a
1000 rpm tan pronto como sea posible después de
su obtención.Se separa el sobrenadante formado, colocándolo en un tubo anticoagulado.
PLASMA ABSORBIDO ( SIN FACTOR IX).
Se puede obtener mediante el siguiente proceso:
--> Añadir una parte de
gel de hidróxido de aluminio a
9 partes de
plasma
citratado.
--> Agitar la muestra.
--> Incubar durante 5 minutos a 37 grados.
--> Centrifugar durante 5 minutos a 3000 rpm.
--> Decantar el
sobrenadante ( éste es el
plasma absorbido) con una pipeta Pasteur
para un tubo apropiado.
USO: se utiliza en la prueba de mezclas ( se redactará más adelante).
SUERO
Es una sustancia de apariencia equivalente al
plasma, con la gran diferencia de que
carece
de las
proteínas involucradas en la coagulación ( en su mayor parte,
fibrinógeno).
Se obtiene dejando una muestra de
sangre entera en un tubo de vacío
sin anticoagulante,
una vez que se forma el coágulo, se
extrae el líquido sobrenadante.
USO: se utiliza en la
prueba de mezclas, en la determinación de
Antitrombina III,
y en la detención de
Productos de la Degradación de la Fibrina/Fibrinógeno.
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En esta imagen se observa, el SUERO (líquido amarillo), y el COÁGULO formado
por: hematíes. plaquetas y leucocitos atrapados en una especie de maya de FIBRINA |
CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS
Si las pruebas no se pueden realizar en un periodo de una
30 minutos después de su extracción,
se conservará en
nevera para
evitar la pérdida de algunos
factores de la coagulación.
El plasma conseguido, a partir de sangre entera, tiene que ser utilizado
antes del fin de las 4
horas siguientes a la extracción . si esto no es posible, debe conservarse refrigerándolo
durante
12 horas, o se conserva durante
1 mes congelándolo rápidamente a
-20º C.
USO DE REACTIVOS
Cada prueba requerirá unos reactivos específicos.
Las
pruebas de factores requerirán la adición de
cloruro cálcico ( viene incluido en el
lote de la prueba específica de la coagulación que lo necesita). Esto es debido a que
el
citrato trisódico, el anticoagulante utilizado en estas pruebas, es
quelante* del
calcio
iónico (Ca++) o
Factor IV, que se encuentra
disuelto en el
plasma, y es
necesario para
que se lleve a cabo la
cascada de la coagulación, y por tanto para la formación del
coágulo de fibrina. Por lo tanto, habrá que
suministrarlo.
Además, suelen encontrarse
liofilizados*. Para la
rehidratación se seguirán las pautas que
en el
protocolo nos establezca el fabricante. Si utilizamos
agua para rehidratarlo, es mejor
que esta sea
destilada, ya que la del grifo podría contener restos orgánicos que interfieran en
la pruebas al contaminarlo.
Una vez que se hace la prueba
no se debe reintegrar a los botes las cantidades sobrantes,
porque se podría
contaminar el reactivo que no se ha utilizado.
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| Estructura molecular del Citrato Trisódico |
VOCABULARIO:
* Quelante. Sustancia que forma complejos fuertes con iones de metales pesados. A
estos complejos se los conoce como quelatos, y generalmente evitan que
estos metales pesados puedan reaccionar.
* Liofilización:
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