FROTIS SANGUÍNEO

PROTOCOLO: FROTIS SANGUÍNEO 

Concepto 

 La extensión sanguínea o frotis es una fina película de sangre extendida sobre un porta, de tal manera que las células estén dispuestas en una sola capa.

 Se utiliza para la observación de las células sanguíneas, para lo cual, tras la extensión de la muestra, se procede a su fijación y tinción.

 Si queremos estudiar la morfología en células vivas se pueden usar colorantes vitales. Se trata de colorantes capaces de fijarse a los distintos componentes celulares sin destruir la célula de forma inmediata. Se usan muy diluidos para disminuir su acción tóxica, aumentando así el tiempo que las células pueden ser observadas vivas.

 Los colorantes vitales más conocidos son el rojo neutro, el azul de metileno, el azul de cresil brillante, el azul tripán y el verde Janus.

Material 

* Dos portaobjetos esmerilados bien limpios y desengrasados (en            alcohol-acetona al 50%).

* Una pipeta de Pasteur desechable.

Técnica

           

1º Coger una pequeña cantidad de sangre del tubo con una pipeta de        Pasteur y depositarla en un extremo del porta.

2º Colocar otro portaobjetos sobre el primero con un ángulo de unos  45º desplazándolo hasta que contacte con la gota de sangre.

3º Dejar que por capilaridad se extienda la gota de sangre por el borde  del portaobjetos.

4º Arrastrar este porta de manera suave y rápida sobre el primer              portaobjetos de manera que la gota de sangre se extienda uniformemente.

5º Dejar secar el porta al aire y rotular con lápiz en la banda mate el  nº de muestra.
     El grosor de la extensión varía en función del tamaño de la gota de      sangre y del ángulo que forman los dos portaobjetos. 
Un ángulo mayor de 45º aumenta el grosor y la extensión queda más corta.

Un ángulo menor de 45º disminuye el grosor quedando la extensión más fina y larga.

Una extensión correctamente realizada debe presentar tres zonas:

a)Cabeza: zona inicial. Los hematíes pueden estar formando más de una capa.

b)Cuerpo: los hematíes se disponen formando una sola capa en una proporción equilibrada. Es la zona ideal para el estudio celular.

c)Cola: es la zona final. Las células se disponen de forma acordonada dejando huecos entre ellas. La cola termina de forma deshilachada (barbas).

Extensiones defectuosas

a) extensiones en las que se ha puesto una gota muy grande. Se llega al final del porta sin que la gota haya sido extendida, no dando lugar a que se formen las barbas.

b) extensiones en las que el porta se levanta antes de acabar de hacer  la extensión. No se forma la cola.

c) extensiones con zonas agujereadas debido a la presencia de grasa en los portaobjetos por falta de limpieza.

d) extensiones en las que los bordes coinciden con los del porta por haber esperado que la gota por capilaridad se extendiera por todo el borde del porta extensor.

e) extensiones con alternancia de zonas gruesas y finas que le dan           aspecto de persiana. Se producen cuando la velocidad de                   deslizamiento no ha sido homogénea.