MUESTRAS Y REACTIVOS EN HEMOSTASIA

                                             

                  BLOQUE DE 

                           HEMOSTASIA  

                               

     TOMA,CONSERVACIÓN Y TIPO DE MUESTRAS; 
                  REACTIVOS

    

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

          --> Estar en ayunas la mañana que se realicen las pruebas.

          --> Evitar tomar medicación las dos semanas previas a las pruebas, sobre todo la que
                puedan  interferir directamente en las mismas; y si se tiene que tomar obligatoriamente,
                se ha de  informarlo  previamente.

                           -  Algunos  medicamentos que pueden interferir son:
                                      ácido acetil salicílico, heparina, anticoagulantes  orales...

                  NOTA: tener en cuenta que una muestra se puede contaminar con heparina 
                               cuando se  obtiene a  través de un catéter de permanencia, por lo cual
                                se tendrá que  lavar  previamente con suero fisiológico a presión, y
                                descartar los 5 ml de sangre.


           

CATÉTER

       -->  Las muestras deben ser de sangre entera, recogidas de manera antiséptica por medio
               de punción venosa, mediante un sistema de tubo al vacío con citrato trisódico
               en una proporción de 1:9.

                   

 Sistema de extracción de sangre al vacío mediante el
uso de un tubo con citrato(  azul), normalmente utilizado
para pruebas de coagulación 

        NOTA:  si un paciente posee un hematocrito con un valor más bajo o más alto 
                                   de lo normal, se  debería hacer un reajuste de la concentración de                                                        anticoagulante.

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
             
                En HEMOSTASIA se trabajan con cuatro tipo de muestras:
                                       
                                    --> PLASMA POBRE EN PLAQUETAS
                                         
                                    --> PLASMA RICO EN PLAQUETAS
                                         
                                    --> PLASMA ABSORBIDO ( AUSENTE DE FACTOR IX)
                                         
                                    --> SUERO

     ¿Qué es el PLASMA?

     Líquido en el cual se encuentran inmersos las células sanguíneas, formado por
     múltiples sustancias, entre ellas, todos los factores plasmáticos que intervienen en la
     coagulación. Ejemplos  de ellos son: fibrinógeno, Factor XII o de contacto, precalicreína,
     etc.

                

                                   PLASMA POBRE EN PLAQUETAS

            Se obtiene mediante  centrifugación  de la muestra con citrato durante 10 minutos 
             a 3000 rpm tan pronto como sea posible después de la extracción de la
             misma. Separar el sobrenadante formado, colocándolo en un tubo anticoagulado.

                            USO: utilizado en la mayoría de las pruebas de coagulación, ya que , nos
                                       interesa más conocer  la actividad y presencia de los factores que                                                        intervienen en coagulación, y como se forma el coagulo de fibrina,
                                       que los  factores y estado de las plaquetas. Por eso mismo las
                                       eliminamos, pero dejando una cierta cantidad, porque también son
                                       necesarias para que este proceso se lleve a cabo.


                                    PLASMA RICO EN PLAQUETAS

            Se obtiene centrifugando la muestra de sangre entera anticoagulada con
           citrato durante 10 minutos a 1000 rpm tan pronto como sea posible después de
           su obtención.Se separa el sobrenadante formado, colocándolo en un tubo                                               anticoagulado.


                                   

                           

       PLASMA ABSORBIDO ( SIN FACTOR IX).

             Se puede obtener mediante el siguiente proceso:

               --> Añadir una parte de gel de hidróxido de aluminio a 9 partes de plasma 

                       citratado.
                

               --> Agitar la muestra.
               

               --> Incubar durante 5 minutos a 37 grados.
                

             --> Centrifugar durante 5 minutos a 3000 rpm.
                 

             --> Decantar el sobrenadante ( éste es el plasma absorbido) con una pipeta Pasteur

                        para un tubo apropiado.

                               USO: se utiliza en la prueba de mezclas ( se redactará más adelante).

       SUERO

    Es una sustancia de apariencia equivalente al plasma, con la gran diferencia de  que carece 
    de las proteínas involucradas en la coagulación ( en su mayor parte, fibrinógeno).
    Se obtiene dejando una muestra de sangre entera en un tubo de vacío sin anticoagulante,
    una vez  que se forma el coágulo, se extrae el líquido sobrenadante.

        USO:  se utiliza  en la prueba de mezclas, en la determinación de Antitrombina III,
                    y en la detención de Productos de la Degradación de la Fibrina/Fibrinógeno.

En esta imagen se observa, el SUERO (líquido amarillo), y el COÁGULO formado
por: hematíes. plaquetas y leucocitos atrapados en una especie de maya de FIBRINA

 CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS

      Si las pruebas no se pueden realizar en un periodo de una 30 minutos después de su extracción,
      se conservará en nevera para evitar la pérdida de algunos factores de la coagulación.

      El plasma conseguido, a partir de sangre entera, tiene que ser utilizado antes del fin de las 4 
      horas  siguientes a la extracción . si esto no es posible, debe conservarse refrigerándolo
      durante 12 horas, o se conserva durante 1 mes congelándolo rápidamente a -20º C.


 USO DE REACTIVOS

     Cada prueba requerirá unos reactivos específicos.

        Las pruebas de factores requerirán la adición de cloruro cálcico ( viene incluido en el 
        lote de la prueba específica de la coagulación que lo necesita). Esto es debido a que
        el citrato trisódico, el anticoagulante utilizado en estas pruebas, es quelante* del calcio 
       iónico (Ca++) o Factor IV, que se encuentra disuelto en el plasma, y es necesario para
       que se lleve a cabo la cascada de la coagulación, y por tanto para la formación del
        coágulo de fibrina. Por lo tanto,  habrá que suministrarlo.

      Además, suelen encontrarse liofilizados*. Para la rehidratación se seguirán las pautas que
      en el protocolo nos establezca el fabricante. Si utilizamos agua para rehidratarlo, es mejor
      que esta sea destilada, ya que la del grifo podría contener restos orgánicos que interfieran en
      la pruebas al contaminarlo.

      Una vez que se hace la prueba no se debe reintegrar a los botes las cantidades sobrantes,
      porque se podría contaminar el reactivo que no se ha utilizado.

Estructura molecular del Citrato Trisódico

VOCABULARIO:

      
       * Quelante. Sustancia que forma complejos fuertes con iones de metales pesados. A 
                          estos  complejos se los conoce como quelatos, y generalmente evitan que 
                          estos metales pesados puedan reaccionar. 

                                                                    

* Liofilización: