TINCIÓN DE PERLS

PROTOCOLO PRÁCTICO:  

TINCIÓN DE PERLS

Fundamento

    Los denominados cuerpos de Pappenheimer son partículas de hemosiderina unidas a material proteico. Aunque la hemosiderina no se tiñe con los colorantes panópticos, sí lo hace el material proteico al que se ha unido y con ello permite que estos acúmulos de hemosiderina se vean con las tinciones panópticas. Aparecen de color azul negruzco y se asocian a estados de exceso de hierro.

    Los siderocitos son hematíes que contienen uno o más gránulos de hemosiderina (gránulos sideróticos). Estos gránulos no se ven en los frotis teñidos con tinciones panópticas. Para observarlos es necesario realizar la tinción de Perls, con la que se tiñen de color azul turquesa.

 

Material necesario

          * Microscopio óptico.

    

          * Tubos de hemólisis. 

      

          * Pipetas Pasteur. 

          * Portas esmerilados

                

          * Sistema de filtración

Miembros de la Clase de Hematología,

preparando el reactivo de Azul de Prusia.

Reactivos

     *  Agua destilada (H₂O).

       *   Metanol (CH₄O).

               

       *  Colorantes:

• Azul de Prusia. Formado por:

                    a)      Acido Clorhídrico (HCl) al 0,2N.

                    b)      Ferricianuro Potásico (K₃[Fe(CN)₆]) al 5%.

• Safranina: al 0,1 % en solución acuosa (colorante de contraste). Se puede sustituir por eosina.

Técnica

          1º.   Preparación del colorante Azul de Prusia**:

               1.2. Hacer una solución de Ácido Clorhídrico (HCl) al  0,2 N.

               1.3. Pesar 5 g de ferricianuro potásico (K₃[Fe(CN)₆]). 

              1.4. Disolver en 100 ml de agua destilada (H₂O), el ferricianuro                                preparado anteriormente.

              1.5.Mezclar al 50% la solución de HCl 0,2 N y la de ferrocianuro                          potásico, obteniendose así el reactivo al completo.

Miembros de la Clase de Hematología, 

en una explicación de la preparación 

del reactivo de Azul de Prusia

        ** El reactivo Azul de Prusia completo, una vez mezclado  y preparado,             es una solución extemporánea; por ello  se debe mezclar justo 
            antes  de su uso y filtrarlo para evitar 
            precipitados.         

      2º. Tinción de los eritrocitos: 

        2.1. Realizamos dos extensiones y las dejamos secar al aire.

        2.2. Colocamos las extensiones en las parrillas de tinción 
               y fijamos las extensiones con metanol (CH₄O) durante 
               10 minutos.

     

            (También se puede hacer en  cubetas de Coplin colocando 
             los portas en sus cestillos correspondientes).

       2.3.   Lavamos con agua destilada (H₂O) y escurrimos.

      2.4. Teñir con el Azul de Prusia durante 20 minutos.

Compañeras tiñendo sus frotis con el

reactivo de Azul de Prusia

Frotis teñidos con Azul de Prusia

     2.5. Lavar con abundantes agua destilada y escurrir bien, 

            dejando secar un poco.

     2.6.  Teñir con safranina al 0,1 %  durante 5  minutos.

Compañera tiñiendo frotis con Safranina

 

Frotis teñidos con safranina

   2.7.   Lavar con abundante agua destilada y dejar secar al aire.

   2.8.  Observar la extensión al menos 10 campos.

  2.9.  Si existen siderocitos se hace el recuento  igual que en uno 
         realizado para  los reticulocitos.

Interpretación

    - Los cuerpos de Pappenheimer  en condiciones normales pueden
      observarse entre un 0,5 -0,8 %.

    - Los siderocitos son característicos de las anemias sideroblásticas y 
      de personas  esplenectomizadas.